É cada vez mais comum que as regulamentações de controle de qualidade incluam o controle microbiológico ambiental e de superfície , o que é praticamente essencial em atividades relacionadas a produtos para saúde ou alimentos.
Para realizar esta análise, os seguintes aspectos devem ser previamente estabelecidos. Em primeiro lugar, o método de amostragem a ser utilizado. Abaixo estão os microrganismos a serem isolados e quantificados, bem como os locais de amostragem. Você também precisa ter o número de amostras em cada sala, bem como a frequência das amostras.
Todos esses pontos recomendados dependem das características específicas do ambiente a ser avaliado.
Uma vez determinados todos esses aspectos, serão realizadas análises que podem ser comparadas entre si e, portanto, obter dados estatísticos. Qualquer comparação de resultados deve levar em consideração os procedimentos de amostragem utilizados, pois existem diferenças importantes na eficiência de coleta de diferentes métodos.
Ao avaliar os resultados obtidos a partir da medição de microrganismos no ambiente ou na superfície, na maioria das vezes nos deparamos com o problema da inexistência de critérios legais de avaliação.
Medição da poluição ambiental
Vários métodos de coleta podem ser usados para realizar análises ambientais, sendo os mais comumente utilizados o método de sedimentação em placa e o método de filtração e impacto em placa de ágar.
O método de sedimentação consiste em deixar as placa de Petri com meio de cultura expostas por um determinado tempo. Este método tem a desvantagem de que podem existir determinados fatores que alteram a sedimentação dos microrganismos (por exemplo, correntes de ar), afetando assim os resultados , e a possibilidade de comparação de diferentes séries analíticas.
Em vez disso, o método de filtragem e impacto evita a alteração dos resultados. Para a aplicação deste método, é utilizado um aparelho que filtra um volume pré-determinado de ar, que posteriormente incide sobre uma placa de ágar. Esta técnica analítica é muito útil para a determinação de contaminação microbiológica após operações de limpeza e desinfecção, além de ser útil para a análise de contaminação ambiental em condições de trabalho.
Saiba o que é : controle de produtos e como pode afetar o meio ambiente e sua empresa.
Incubação da placa
As placas utilizadas na análise, convenientemente identificadas, devem ser colocadas na estufa de cultura. A tabela a seguir detalha as condições de incubação para contagens totais de germes, bem como para bolores e leveduras.
Leitura e interpretação dos resultados
A partir das contagens feitas (expressas em UFC), o resultado é calculado para expressá-lo em NMP (número mais provável) por m 3 . O valor de NMP é calculado a partir dos dados de UFC obtidos na placa, aplicando a lei de Feller.
As colônias que se desenvolveram em uma placa de cultura têm sua origem em um germe ou grupo de germes que passam pela peneira, sendo impossível distinguir se a formação de uma colônia se deveu a um único germe ou a vários germes que passaram pelo mesmo orifício. Portanto, não é possível estabelecer uma relação direta entre a UFC desenvolvida em uma placa de cultura e o número de microrganismos por m 3 .. A lei de Feller faz uma correção estatística que permite quantificar o número de germes que passaram por ela para cada orifício de peneira. Desta forma, a partir da UFC desenvolvida na placa de cultura, obtém-se o Número Mais Provável (NMP) de germes que impactaram o meio de cultura, e conhecendo o volume de ar filtrado, obtém-se o NMP de germes por metro cúbico.
Interpretação dos resultados: Limites críticos
Para qualificar a qualidade ambiental em uma sala de trabalho na indústria alimentícia, devem ser estabelecidos limites críticos para determinar as condições corretas. Para as indústrias alimentícias não há regulamentação que determine esses limites, razão pela qual a Betelgeux estabeleceu especificações próprias, com base em resultados obtidos em diferentes séries analíticas realizadas nas indústrias alimentícias, que foram submetidas a tratamento estatístico. As séries analíticas foram realizadas em salas onde são realizadas diariamente as tarefas de Limpeza e Desinfecção, validadas e consideradas corretas; incluindo procedimentos específicos para desinfecção ambiental.
Os limites críticos obtidos são os seguintes:
Especificações para moldes em indústrias alimentícias
Tabela 1. Especificações Betelgeux para moldes em ambientes da indústria alimentícia.
Na indústria alimentícia, os níveis podem variar dependendo do risco da sala e dos alimentos que nela são manuseados. Dependendo do tipo de sala, os níveis de fungos descritos na Tabela 2 podem ser recomendados:
Tabela 2. Limites críticos utilizados em diferentes tipos de quarto.
Especificações usadas na indústria farmacêutica
Na indústria farmacêutica, foi determinada a qualidade microbiológica das diferentes áreas de trabalho, classificando-as de acordo com o risco e atribuindo um limite crítico a cada uma.
Na preparação de preparações farmacêuticas estéreis, é necessário garantir produtos de alta qualidade microbiológica que não sejam contaminados por microrganismos presentes no ar da área de produção, para os quais é necessário ter áreas limpas. Nessas áreas, buscamos cumprir os controles internacionais que visam minimizar os riscos de contaminação microbiana.
A norma para a produção de preparações farmacêuticas estéreis contempla o controle microbiológico ambiental, tanto do ar quanto das superfícies em diferentes pontos, estabelece uma contagem bacteriana aceitável expressa em unidades formadoras de colônias (ufc), de acordo com as áreas de trabalho e em situações de repouso. Existem várias classificações para esta norma, conforme indicado na tabela 3 das classificações internacionais estabelecidas para o estudo de áreas limpas na indústria farmacêutica.
Tabela 3. Limites microbiológicos em ambientes para diferentes tipos de sala na indústria farmacêutica.
Tanto o padrão de medicamentos da União Européia (GMP) quanto o padrão da Farmacopeia dos Estados Unidos (USP 209 E) são equivalentes entre si e com o padrão internacional ISO 14644-1 (Tabela 3).
A BPF classifica as áreas limpas em graus que estabelecem parâmetros da qualidade microbiológica do ar.
– Zona A: Área específica para operações de alto risco como enchimento, bandejas de rolhas, ampolas, frascos abertos e realização de conexões assépticas. Essas condições são normalmente alcançadas em cabines de fluxo laminar. Esses sistemas devem fornecer uma velocidade do ar homogênea de 0,45 m/s ± 20% no ponto de trabalho. O limite para microorganismos é <1 ufc/m 3 de ar de acordo com GMP4 e 3 ufc/m 3 de acordo com USP 209 E3.
– Zona B: Ambiente para a zona de grau A no caso de preparação e enchimento asséptico. O limite de microrganismos por m 3 de ar é de 10 UFC de acordo com GMP4 e 3 UFC de acordo com USP 209 E3.
– Zona C e D: Áreas limpas para realização de fases menos críticas da fabricação de medicamentos estéreis. Os limites de microrganismos por m 3 de ar para ambas as zonas são 100 ufc/m 3 e 200 ufc/m 3 de acordo com GMP4; e 20 e 100 cfu/m3 de acordo com USP 209 E, respectivamente.
conclusão
O controle microbiológico ambiental e de superfície é essencial na produção de produtos farmacêuticos e alimentícios.
Antes de realizar as análises, devem ser estabelecidos os diferentes critérios, entre os quais o método de amostragem , os microrganismos a serem isolados e quantificados, bem como os locais de amostragem. Também é importante determinar o número de amostras em cada sala, bem como a frequência das amostras. No entanto, todos estes pontos a ter em conta dependem, em certa medida, das características específicas do ambiente a analisar. A partir daí, e tendo em conta os procedimentos de amostragem utilizados, podem ser obtidos dados estatísticos.